4%多聚甲醛固定細胞_室溫_溶液_染色_防護眼鏡

摘要：

多聚甲醛〔PFA〕固定是一種常用細胞固定方法，大量用途于免疫熒光、原位雜交實驗中。它通過交聯蛋白質、核酸，保持細胞結構完整性，和此同時減少細胞內酶活性對后續實驗影響。

，于操作前需準備14%多聚甲醛溶液。通常狀況下，使用4%濃度最為常見。將多聚甲醛粉末溶解于預熱至60℃左右PBS緩沖液中，并連續攪拌直至完全溶解。為避免多聚甲醛聚合，可加入少量甲醇作為助溶劑。之后，將溶液過濾以去除也許存于不溶物，并調節pH值至7.4左右。

接下來是細胞固定具體步驟。對于貼壁細胞，先用PBS清洗兩次，每次5分鐘。然后向培養皿中加入適量4%多聚甲醛工作液，確保覆蓋整個樣品表面。室溫下固定20分鐘即可，若溫度較低可適當延長固定時間。對于懸浮細胞，則要離心收集細胞并重懸于多聚甲醛中進行固定。

固定完成后，用PBS輕輕洗滌三次，每次5分鐘，以去除殘留固定劑。為了增強后續染色效果，有時還需進行透化處理。例如，用0.1%0.5% Triton X100于室溫下透化510分鐘。最后，按照實驗需求進行封閉、染色操作。

4%多聚甲醛固定能夠很好保存細胞形態、抗原性，是細胞學研究中很大技術。但要注意是，操作時應佩戴手套、防護眼鏡，避免直接接觸皮膚、眼睛。