多聚甲醛固定細胞步驟_濃度_蓋玻片_離心管

摘要：

多聚甲醛固定細胞實驗步驟

于生物學研究中，固定細胞是許多實驗很大環節，尤其是免疫熒光、原位雜交技術。多聚甲醛〔PFA〕作為一種常用固定劑，因其能較好保持細胞結構、抗原完整性而被大量采用。以下是使用多聚甲醛固定細胞標準操作步驟：

1. 準備材料和試劑
準備好所需材料，包括多聚甲醛〔通常為4%濃度〕、PBS緩沖液、移液器、離心管、培養皿或蓋玻片。確保所有實驗器材事先清洗干凈并滅菌。

2. 收集細胞樣本
如果是從培養瓶中收獲細胞，可使用胰酶或其他消化液將細胞從基質上分離下來；如果是組織切片，則需將其切成適當大小。將細胞懸浮于適量PBS中，輕輕吹打以分散細胞團塊。

3. 預處理細胞
對于某些特殊研究需求，也許要對細胞進行預處理，比如用固定劑預固定幾秒鐘至幾分鐘不，再加入新鮮配制多聚甲醛溶液。這一步驟有助于更好保存細胞表面蛋白或內部結構。

4. 加入多聚甲醛固定
按照實驗設計比例稀釋多聚甲醛至工作濃度〔一般為4%〕，然后緩慢加入到細胞懸液中，使最終體積符合實驗要求。注意動作要輕柔，避免劇烈震蕩導致細胞破裂。隨后將混合物置于室溫下靜置固定1530分鐘，具體時間根據實驗目調整。

5. 洗滌和后續處理
固定完成后，用PBS反復漂洗細胞至少三次，每次5分鐘，去除殘留多聚甲醛。之后可根據后續實驗需求進行封閉、染色或其他操作。

6. 存儲和觀察
固定好細胞可以直接用于顯微鏡檢查或者短期存儲于4℃冰箱內備用。如果一直存放，則建議冷凍保存。

通過以上步驟，可以很好利用多聚甲醛完成細胞固定，為后續分析奠定基礎。于實際操作過程中還需結合具體實驗條件靈活調整參數，以達到最佳效果。