4%多聚甲醛固定方法_樣本_細胞_溶液_切片

摘要：

4%多聚甲醛固定方法及其用途

于生物醫學研究、組織學行業，固定是組織樣本處理很大步驟。其中，4%多聚甲醛〔Paraformaldehyde, PFA〕固定因其優良固定效果、較低毒性及相對簡便操作流程而被大量使用。本文將介紹4%多聚甲醛固定基本原理、操作步驟還有注意事項。

基本原理

多聚甲醛是一種甲醛聚合物，于水中加熱后可分解為游離甲醛分子。這些甲醛分子通過和蛋白質中氨基有交聯反應，使細胞結構保持穩固。和此同時，它還能很好保留細胞內蛋白、核酸生物大分子形態、功能特性，因此適合用于免疫組化、原位雜交許多實驗。

操作步驟

1. 準備固定液：稱取4克多聚甲醛粉末溶解于100毫升蒸餾水中，并加入少量NaOH調節pH至7.27.4。將溶液置于60℃水浴中攪拌直至完全溶解。
2. 冷卻和過濾：待溶液冷卻至室溫后，用0.2微米濾器過濾以去除不溶性顆粒。
3. 組織樣本處理：迅速將新鮮采集組織塊放入冷固定液中，確保樣本完全浸沒。通常固定時間為424小時，具體時間取決于樣本類型及實驗需求。
4. 后續處理：固定完成后，依次進行脫水、透明、包埋步驟，最終制備成石蠟切片或冷凍切片備用。

注意事項

固定過程中需保持低溫環境〔4℃〕，避免溫度升高導致抗原表位丟失。
使用時應佩戴手套、防護眼鏡，防止接觸皮膚、眼睛。
固定后樣本應及時處理，避免長時間存放以免影響后續實驗結果。

4%多聚甲醛固定方法簡單易行，但細節控制非常很大。正確掌握該技術對于獲取高質量研究數據至關很大。